臨床上,各種炎癥、潰瘍、燒傷等造成皮膚的損傷修復(fù)是亟需解決的問題。研究表明,脂肪組織來源的干細(xì)胞促進(jìn)皮膚創(chuàng)傷修復(fù)的一個(gè)重要作用途徑是旁分泌,旁分泌的載體外泌體可能是促進(jìn)創(chuàng)傷愈合的關(guān)鍵因素。與直接使用干細(xì)胞相比,富集了來源細(xì)胞的蛋白質(zhì)、mRNA和miRNA等信號(hào)分子的外泌體具有生物相容性、低毒性、低免疫原性等安全性特性。相對(duì)于其他干細(xì)胞來源,人脂肪干細(xì)胞(human adipose-derived stem cells,hADSC)來源容易且體外擴(kuò)增速度快,外泌體獲得更為容易,因此hADSC的外泌體更適合運(yùn)用于皮膚創(chuàng)傷修復(fù)。

為了探究人脂肪干細(xì)胞源外泌體對(duì)表皮細(xì)胞遷移功能的影響,深圳市第二人民醫(yī)院張遠(yuǎn)遠(yuǎn), 深圳大學(xué)曾悅, 朱艷霞從正常人抽脂手術(shù)中獲取的脂肪組織分離培養(yǎng)脂肪干細(xì)胞,采用超速離心和超濾結(jié)合的改良法分離收集細(xì)胞上清液中的外泌體,采用透射電鏡、動(dòng)態(tài)光散射法以及Western印跡法鑒定分離出的外泌體。采用0、50、100、200、250、300、400、500、600、800 μmol/L H2O2分別作用HaCaT細(xì)胞1 h,CCK8法檢測H2O2對(duì)HaCaT細(xì)胞存活率的影響。將HaCaT細(xì)胞分為正常組(無預(yù)處理)和損傷組(用100 μmol/L H2O2損傷預(yù)處理0.5 h),再將兩組分別分為對(duì)照組和治療組,治療組與外泌體共培養(yǎng),對(duì)照組不與外泌體共培養(yǎng)。用共聚焦熒光顯微鏡觀察PKH26熒光標(biāo)記的外泌體是否能被細(xì)胞吞噬,用劃痕實(shí)驗(yàn)觀察HaCaT細(xì)胞修復(fù)率,用Transwell實(shí)驗(yàn)評(píng)估細(xì)胞遷移能力。多組間比較采用單因素方差分析,兩組間比較采用LSD檢驗(yàn),相關(guān)性檢驗(yàn)采用Spearman檢驗(yàn)。

透射電鏡觀察顯示,分離所得的脂肪干細(xì)胞源外泌體是直徑60 ~ 80 nm的茶托樣納米囊泡,而動(dòng)態(tài)光散射法測量顯示,分離的外泌體純度為,表達(dá)CD63、Alix和TSG101,具有外泌體的基本特征。CCK8法顯示,0 ~ 800 μmol/L H2O2處理HaCaT細(xì)胞1 h后細(xì)胞存活率呈逐漸降低趨勢(shì),H2O2濃度與HaCaT細(xì)胞存活率呈負(fù)相關(guān)(r = ,P < )。共聚焦熒光顯微鏡觀察,分離的外泌體能被損傷后的HaCaT細(xì)胞攝入。劃痕實(shí)驗(yàn)顯示,正常對(duì)照組、正常治療組、損傷對(duì)照組、損傷治療組HaCaT細(xì)胞12 h劃痕面積修復(fù)率分別是 ± 、 ± 、 ± 、 ± ,損傷治療組顯著高于損傷對(duì)照組(t = ,P < )。Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,4組10倍視野下遷移細(xì)胞數(shù)分別是 ± 、 ± 、 ± 、 ± ,損傷治療組大于損傷對(duì)照組(t = ,P < )。

人脂肪干細(xì)胞源外泌體具有促進(jìn)氧化應(yīng)激損傷的HaCaT細(xì)胞遷移的能力。(生物谷)

小編推薦會(huì)議? 2020(第五屆)外泌體與疾病研討會(huì)

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